ICG-COOH使用常见问题，仅参考：
（注意：实际原因可能与实验中多重因素有关，仅参考）
问: 什么是 ICG-COOH？它和普通的 ICG 有什么区别？
答: ICG-COOH是吲哚菁绿分子经过化学修饰后得到的衍生物。它在保留了ICG近红外荧光特性（激发/发射波长通常在780nm/810nm左右）的同时，在其结构上引入了羧基基团。这个羧基是活性官能团，可以通过标准的羧基活化化学（如 EDC/NHS 活化）方便地连接到含有氨基的生物分子（如蛋白质、抗体、肽、氨基修饰的核酸或纳米材料）上，形成稳定的酰胺键。
问：如何正确保存？开封后能存多久？
答：冷冻干燥粉：
未开封：-20℃避光干燥保存，保质期2年
开封后：立即分装密封，避免反复冻融→6个月内用完。
问: 为什么我的 ICG-COOH 标记效率很低或者失败了？
答: 可能的原因包括：
染料聚集：溶解不当，导致染料自身聚集，失去反应活性或荧光。
溶剂不兼容：标记反应体系中存在高浓度去垢剂、强还原剂、强酸/强碱、或能与活化剂反应的高浓度伯胺缓冲液（如 Tris）。
活化剂失效/不当：EDC/NHS 失效（需新鲜配制）、比例不当、活化时间不足或过长。
pH值不当：羧基活化（EDC/NHS），连接反应（与氨基反应）两者均需要在适宜的PH值下。确保缓冲液合适。
反应物浓度过低：ICG-COOH 或目标分子的浓度过低，导致反应动力学缓慢。
缓冲液选择不当：缓冲液中含伯胺基团（如 Tris, Glycine）会与活化后的ICG-COOH竞争反应目标分子。首选无伯胺缓冲液。
光照/氧气降解：操作过程未严格避光或在空气中暴露过久，导致染料分解。
目标分子问题：目标分子的氨基基团被封闭或空间位阻过大，难以接近。
问: ICG-COOH 与生物分子（如抗体）的标记比例应该是多少？
答: 没有固定比例，需要优化。
问：为什么偶联产物出现沉淀或浑浊
答：可能是：
有机溶剂（DMSO/DMF）浓度过高导致蛋白变性
反应体系pH剧烈波动（超出抗体稳定范围的pH）
问：如何纯化 ICG-COOH 标记后的产物？
答: 常用：
凝胶过滤层析/脱盐柱： 快速去除未反应的游离染料和小分子副产物（如尿素）。适用于大多数蛋白、抗体标记。选择合适孔径的柱子。
透析：适用于分子量较大的复合物，但耗时长，需要多次换液，且染料可能吸附在透析袋上造成损失。
超滤离心管：适用于浓缩和去除小分子。注意浓缩过程中的染料损失。
亲和层析：如果目标分子有特定配基，可在标记后使用，去除聚集物和部分游离染料。
问: ICG-COOH 标记后产物的荧光很弱，可能是什么原因？
答: 除了前面中提到的标记效率低的原因外，还需考虑：
自淬灭：标记密度过高导致染料分子间距离过近，发生荧光淬灭。尝试降低标记比例。
环境淬灭：标记位点附近的环境（如疏水性、极性、pH）不利于染料荧光发射。尝试标记不同的分子或改变标记位点。
染料降解：在标记、纯化或保存过程中染料受光照、氧气、热或不利 pH 影响而分解。严格避光、低温操作。
仪器设置：检查成像设备或荧光计的激发/发射波长是否正确设置在 ICG 的范围内，增益、曝光时间等参数是否合适。
游离染料未除净：纯化不彻底，大量游离染料存在可能会干扰测定或淬灭结合态染料荧光。
问: ICG-COOH标记后的产物可以用于哪些应用？
答: ICG-COOH标记产物可应用于生物医学研究领域，利用其近红外荧光特性：
体内成像：小动物活体荧光成像、靶向成像、血管成像、淋巴成像等。
体外成像：细胞标记与示踪、组织切片成像、Western Blot 近红外荧光检测。
流式细胞术：检测特定细胞表面或胞内靶点。
荧光显微成像：共聚焦、双光子等显微镜观察生物分子定位与相互作用。
构建多功能探针：作为荧光报告基团，与其他功能基团（如靶向分子、MRI 造影剂）结合，构建多功能探针。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献/科研资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
