CY5-NHS ester是一种氨基反应性荧光标记试剂，通过其活性N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS ester）基团与生物分子（如蛋白质、抗体、多肽）的伯氨基共价偶联，赋予目标分子红色荧光特性。凭借CY5的远红光发射（670 nm）特性，该探针显著降低生物样本自发荧光干扰，应用于蛋白质互作分析、活细胞表面标记及多色荧光显微成像研究。
化学结构
CY5荧光团：激发波长（Ex）649 nm，发射波长（Em）670 nm（红色通道），适配635 nm激光器与Cy5滤光片组。
NHS活化酯：在弱碱性条件下特异性靶向赖氨酸ε-氨基或蛋白N端氨基，形成稳定酰胺键，标记效率>90%。
亲水性磺酸基团：引入磺酸基增强水溶性（溶解度>10 mM），减少疏水聚集导致的非特异性结合。
性能优势
宽谱兼容性：与FITC（绿色）、DAPI（蓝色）、CY3（橙色）无光谱重叠，支持4色同步成像。
低细胞毒性：标记后不影响抗体亲和力或酶活性（ELISA验证）。
标记位点特异性：仅靶向伯氨基。
光穿透深度：适合厚组织切片（>100 μm）。
科研应用场景
抗体荧光标记：偶联抗体，用于细胞激活过程的流式细胞术分析。
酶活性示踪：标记胰蛋白酶后，通过荧光淬灭法实时监测酶解反应动力学。
活细胞动态成像：标记抗体，共聚焦显微镜追踪配体结合后受体内吞与再循环过程。
多色共定位分析：联合CY3标记的膜蛋白（如CD44）与DAPI核染，解析细胞膜-细胞器互作网络。
FISH探针标记：通过氨基修饰的DNA探针偶联CY5，用于染色体原位杂交或RNA定位。
量子点表面修饰：将CY5-NHS ester偶联至氨基化量子点，构建双模态荧光探针。
成像参数设置
共聚焦显微镜：Ex 635 nm激光（5%功率），Em 660-700 nm收集通道。
活体成像：小动物成像系统使用Cy5.5滤光片组（Ex 675 nm/Em 720 nm）。
注意事项
避光操作：所有步骤需在避光条件下进行，防止染料光解。
湿度控制：NHS酯易水解，需确保反应体系无水。
标记比例优化：过高标记密度可能导致目标分子聚集或失活，建议通过预实验确定最佳比例。
【星戈瑞stargraydye】以上数据均来自文献资料,星戈瑞暂未进行独立验证, 仅供参考！(以上文中所述仅限于科研实验及实验室环境)
