荧光染料可单独使用，也可组合成复合荧光染料使用。其中复合荧光染料是利用荧光共振能量转移技术合成的荧光染料，由距离非常近、能量可以在彼此间传递的一个供体及一个受体荧光物分子所组成。复合染料在受体分子的激发波长被激发，在供体分子的发射波长发射一个光子。
ICG是一种特殊的荧光染料，可被波长范围在750～810 nm的外来光所激发，发射波长约840 nm的近红外光。局部注射的ICG可被淋巴系统吸收并与淋巴系统中的白蛋白结合，随淋巴系统引流至淋巴结最终回流至血液系统。由于淋巴系统转运缓慢，ICG可在淋巴系统内存在较长时间，ICG荧光成像技术正是基于以上原理，通过特殊的显像设备实现引流淋巴管和淋巴结的示踪。
荧光染料染色指数是阳性细胞群的平均荧光强度与阴性细胞群的平均荧光强度之差与阴性细胞群荧光强度标准差之间比值的一半。荧光染料染色系数只和抗体克隆与质量、荧光团纯度与质量、荧光修饰比、激光线及其功率、长通和带通滤光片、目的细胞等因素相关。
