随着蛋白荧光标记技术不断发展,各类荧光素应用于生物实验中,目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。
星戈瑞简介——荧光实验中的常见十大相关专业术语
红色荧光蛋白来源于珊瑚虫,这是一种跟绿色荧光蛋白同源的荧光蛋白,在紫外光的照射下,可发射出红色荧光。相比于GFP,它有更高的荧光强度,成像背景低,并能激发和发射更长的波长。
绿色荧光蛋白GFP是一种可以发出绿色荧光的蛋白质。GFP的晶体结构显示,蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构,长420nm,宽240nm,由11个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成,桶的顶部由3个短的垂直片段覆盖,底部由一个短的垂直片段覆盖,对荧光活性很重要的生色团则位于桶的大空腔内。
星戈瑞简介-红色荧光蛋白/绿色荧光蛋白以及其他类型荧光蛋白
荧光标记策略是自发荧光蛋白、小分子荧光标志物染料、纳米晶体材料(即量子点材料)、小分子蛋白质标签等等这些材料都可以作为荧光标志物,结合荧光成像检测仪器可以对目标蛋白的表达情况、细胞中的定位情况、相互作用、活性状态等指标进行研究。
蛋白荧光标记技术是利用级联放大反应原理,将敏感性且易于检测的荧光素通过某个基团吸附或共价结合后,标记到特异性抗原或抗体分子上,应用荧光显微镜观察荧光标记物因增强放大效应而产生颜色、光谱等变化,以分析示踪相应抗体或抗原性质与含量的方法。
在绿色荧光蛋白被发现后,科学家从珊瑚虫中分离出了能在紫外照射下发出红色荧光的蛋白质—红色荧光蛋白 (RFP) 。相比于GFP,它有更高的荧光强度,成像背景低,并能激发和发射更长的波长。
菁染料(Cyanine)简称Cy,即花菁素系列荧光染料,是具有多聚次甲基桥链化学结构特点的一类合成荧光染料。菁染料Cy分为脂溶性Cy染料、水溶性Cy染料。
蛋白标记的主要目的是监测生物过程、辅助检测(例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测)或者纯化标记后的蛋白及其结合对象。蛋白质的标记能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。