FITC，异硫氰酸荧光素，是荧光素的衍生物。异硫氰酸基团可与蛋白的氨基末端或者伯胺反应从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。除了用作蛋白质标记物，还可用作蛋白质荧光示踪剂，标记抗体用以快速鉴定病原体，以及用于蛋白质和多肽（HPLC）的微量测序。
FITC标记抗体流程：
（1）将待交联的蛋白（浓度≥1mg/ml）对交联反应液透析三次4℃，至pH=9.0。交联反应液配制方法：7.56g NaHCO3，1.06g Na2CO3，7.36g NaCl，加水定容至1 L。
（2）将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。
（3）按P:F（蛋白质:FITC）=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，暗处4 ℃反应8 h。
（4）加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L，4 ℃终止反应2 h。
（5）将交联物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。
（6）交联物的鉴定
蛋白浓度（mg/mL） = [ A280-0.31*A495 ] / 1.4
F/P比例: 3.1*A495 / [A280-0.31*A495 ]，该值应介于2.5 ~ 6.5之间。
（7）FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4℃避光保存。 储存条件：4℃避光保存
FITC是一种常用的绿色荧光探针。FITC的吸收（激发）和发射峰参见下表。
| Fluorophore | Absorption Peak(nm) | Emission Peak(nm) |
| FITC | 492 |
520 |
当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键（thiocarbmide）结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下：
FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → FITC-NS-C-N-H2-蛋白质
常用Marsshall（1958）法标记荧光抗体，也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark等（1963）的透析标记法。
