Cy3 SE是一种近红外荧光标记染料,可溶于有机溶剂如 DMSO,DMF,被用于标记肽、蛋白质和寡聚体等生物分子。
荧光素FITC标记抗体之Chadwick法介绍
FITC,中文名异硫氰酸荧光素,又称为荧光素-5-异硫氰酸盐,英文全称Fluorescein Isothiocyanate,其形态为黄色粉末,具有高吸收率、荧光量子产率和良好的水溶性等特点,是生物学中应用的一种绿色荧光素衍生物。
抗体:用于标记的抗体,要求是高特异性和高亲和力的,一般为纯化后的单抗或多抗。
荧光免疫技术是根据抗原抗体反应的原理,将不影响抗原抗体活性的免疫荧光色素标记在抗体或抗原上,与其相应的抗原或抗体结合后,利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。该法包括直接法和间接法。
荧光免疫技术是根据抗原抗体反应的原理,将不影响抗原抗体活性的免疫荧光色素标记在抗体或抗原上,与其相应的抗原或抗体结合后,利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。该法包括直接法和间接法。
荧光抗体技术是以荧光素标记抗体,与切片中组织或细胞抗原反应,经洗涤分离后,在荧光显微镜下观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其部位,借此对组织细胞抗原进行定性和定位检测,或对自身抗体进行定性和滴度测定,此技术亦称荧光免疫组织化学技术。该法包括直接法和间接法。
荧光主要的激发光与发射光谱主峰之间的差异称为stokes shift(斯托克位移), 常见的stokes shift不超过几十纳米。实验中分子发荧光:先要吸收光能,使电子跃迁到较高能级或激发态,当电子释放部分或全部光能时,就会发出荧光。失去的激发能是非辐射性的,失去的能量低于吸收的能量。
辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基,加入抗体IgG后该醛基与IgG氨基结合,形成Schiff氏碱。
FITC(异硫氰酸荧光素)是一种荧光素衍生物。常作为荧光探针应用于制备分子生物学或糖类聚合物的结合物分子,例如葡聚糖、壳聚糖、活性基团等。FITC常用作蛋白质或多糖的不同底物的标记试剂,以及标记抗体(IgG)以及其它免疫应用。