FITC异硫氰酸荧光素是目前较为常用的标记抗体的方法,FITC一般呈黄色、褐色或褐黄色粉末或结晶,性质稳定在低温中能保存数年。在碱性条件下,FITC的碳酰胺键可与抗体蛋白上的赖氨酸氨基共价结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个抗体分子上最多能标记15~20个FITC分子,被标记的抗体仍能保持与相应抗原结合的能力,在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光,通过荧光显微镜进行观察或利用流式细胞仪分析,从而对抗原进行定性、定位或定量。
活化的荧光染料,例如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、罗丹明B(Rhodamine B)或Alexa Fluor染料等,可用于标记抗体或蛋白功能基团,生成分子探针并通过荧光成像进行检测。当用荧光染料化学标记特异性抗体或其他纯化的生物分子时,它们成为用于检测靶抗原或相互作用配偶体的荧光探针,应用于细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹和酶联免疫吸附实验(ELISA)。
常见的荧光染料主要有:荧光素类、罗丹明类、吖啶类、芴类和香豆素类。异硫氰酸酯荧光素(FITC)是常用的蛋白质标记试剂,用于免疫技术和DNA序列测序中。
荧光是由光子激发分子,使其达到电子激发态后为回到基态而产生的发光。它是由单重态基态的光子吸收提升到单重态激发态而产生的。当被激发的分子返回基态时,会发射一个比被吸收光子能量更低的光子,对应于更长的波长。
荧光染料是一种荧光化合物,可在激光激发后重新发光。荧光团通常包含几个组合的芳族基团,或具有多个键的平面或环状分子。 PEG间隔物增加水溶性,在成像和诊断研发中实现的生物标记。 荧光染料参数表能够让您查看某一选定荧光染料的性能参数,并确定其是否适合于您的实验,以及适合的实验方法。
菁染料是近红外荧光染料中常用的一类荧光染料,由于细胞和组织的自发荧光在近红外波段最小,因此在检测复杂生物系统时,近红外染料能提供高的特异性和灵敏度。同时,由于光波在近红外区段的组织透过性好,菁染料的摩尔吸光系数在荧光染料中高,Cy7 NHS ester, Cy5.5 amine 和Cy3 azide的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度高、稳定性长波长染料。适合于活体动物体内成像代替放射性元素。
香豆素荧光衍生物产品,波长是是400-550nm,可以在香豆素末端修饰NHS活化脂、叠氮N3、MAL马来酰亚胺,氨基NH2等活性基团,除此之外还可提供BODIPY荧光活性染料,CY系列活性荧光染料等等产品。
Bodipy氟化硼二吡咯类荧光染料相对比于荧光素、罗丹明或者菁染料有着较高的选择性、高灵敏度、高荧光量子产率、高摩尔消光系数、良好的光学稳定性和对PH不敏感的优点被应用于生物标记、荧光探针及生物成像。
吲哚菁绿(ICG)是一种具有近红外特征吸收峰的三碳花菁染料,最大发射波长在795~845nm之间,具有两亲性结构既亲水又亲油的特性.近红外光在组织中的穿透深度较大,且受生物组织本底的影响较小,由于ICG具有近红外吸收和发射荧光特性,可作为一种体内组织穿透剂。ICG能够强烈地吸收光能将其转化为热能或产生单线态氧,可用于光热治疗(PTT)或光动力治疗(PDT)。
Cy7荧光标记抗体/蛋白试剂盒可以通过抗体/蛋白上的伯胺基团(如赖氨酸),简单、快速地实现抗体/蛋白与荧光染料的共价偶联。此为通用型试剂盒,适合Cy7荧光标记各种分子量不一致的抗体/蛋白。偶联在30分钟内即可完成,偶联效率可达70%左右。使用超滤管纯化,可快速去除多余的Cy7荧光染料,且不会损失抗体/蛋白。