异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料,发射波长为520 nm的荧光染料,是目前常用的荧光标志物;它的激发波长接近488 nm,光量子得率高,但受pH影响较大。随着PH的降低而减弱,因此,在使用FITC时需格外注意溶液的酸碱度。
流式细胞术对荧光素的选择搭配有着很高的要求,尤其是对于多色实验来说,荧光素搭配效果直接影响到检测效果,所以各种荧光素偶联的抗体是必不可少的。
荧光素按激发光波长来分,主要是激发波长为375nm、405nm、488nm和633nm四类。其中,常用的是激发波长为488nm和633nm的荧光素,如FITC、PE、APC、PI等。
罗丹明是一种邻苯二酚类荧光染料,主要用于生物染色,其是一类化合物总称,包括罗丹明B,罗丹明123等。
异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate isomer)这是一类试剂的总称,包括异硫氰酸荧光橙红,异硫氰酸荧光黄,异硫氰酸荧光红,异硫氰酸荧光素异构体I等。
抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等,还有一些其他的标记方法例如金标记,星戈瑞分享的是这些抗体标记的基本原理、操作步骤。
FITC标记抗体的原理:在碱性条件下(pH8.5以上),FITC的异硫酸基在水溶液中与免疫球蛋白的赖氨酸r氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键,成为标记荧光免疫球蛋白,即荧光抗体。一个Ig分子上能标记15~20个FITC分子。
荧光抗体技术主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。通过对免疫荧光技术的原理、标本制作、实验类型和应用的概述,介绍了免疫荧光技术方法,为实际应用提供参考。
链霉亲和素(SA)是Streptomyces avidinii菌的分泌物,其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似