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多肽荧光标记/蛋白荧光标记那些原则上区别,你知道多少

时间:2023-03-07    阅读:420    点赞:0

“我想了解蛋白荧光标记试剂”,“我自己有个多肽,你们可以标记吗?”“多肽怎么这么贵呀,能不能便宜点”等等等,最近小编在前端收到好多多肽、蛋白标记的询单,服务到最后被反馈报价能不能优惠点,不是小编报的高,你看看他的耗材就知道它是真的好不容易,才送到你的手上。

今天小编就多肽/蛋白荧光标记那些原则上的区别,来给大家解析解析

一、首先肯定是大家最关心的能不能标记上,怎么标记?

1、多肽标记:

多肽荧光标记通常在多肽合成过程中,就已经标记上,此时其他所有活性基团均被保护起来,所以多肽的荧光标记是非常精准的定点标记,最后再通过HPLC纯化,提高被标记肽的纯度至95%以上或98%以上。

 

打个比方:比如一段序列使用FITC标记
序列为:H2N-D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9-COOH

 

序列中有3个氨基,均可分别标记上FITC,如

标记在N端氨基上:FITC-D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9

K6的侧链氨基上:D1-A2-G3-L4-E5-K6(FITC)-G7-V8-K9

K9的侧链氨基上:D1-A2-G3-L4-E5-K6-G7-V8-K9(FITC)

 

2、蛋白标记

通常一个蛋白分子中会有很多个氨基,巯基,或者其他基团。例如荧光基团与蛋白分子的氨基结合,因为氨基的数量不是唯一的,所以蛋白分子和荧光基团会出现很多种组合,最终产物肯定是分子结构不单一的混合物。因此蛋白的荧光标记是非定点标记的,也称之为随机标记。不过在一些实验研究中,这个因素可以忽略,只要蛋白分子被标记上荧光基团就行,而不在乎荧光基团标记在哪个位点。

 

二、其次当然是大家关心的预算问题,除了技术上,原料的损耗也是很重要滴。

1、多肽标记:

多肽荧光标记中,通常其荧光分子的使用量是蛋白标记使用量的数十倍,甚至百余倍,比如想拿到5mg 95%荧光标记的多肽,至少需要200mg或300mg荧光分子。

2、蛋白标记

蛋白荧光标记可采取等摩尔量的投料比的方式,荧光分子的用量可能只有几毫克。受荧光分子原料的价格限制,经常用做荧光标记的种类很少,常见的就FAM、FITC、TAMRA、Rhodamine B等。

 

三、最后是单独注意的一项,即荧光标记之后的环境

1、多肽标记:

多肽荧光标记后,通常会采用高浓度三氟乙酸处理,处于强酸环境中,然后通过HPLC纯化。

2、蛋白标记

蛋白荧光标记后的处理就相对多肽温和多了,可直接通过透析或HPLC纯化。

 

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