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星戈瑞荧光-免疫荧光标记技术及实验步骤

时间:2022-10-21    阅读:571    点赞:0

免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)创于20世纪40年代初,首次是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。当时由于异氰酸荧光素标记物的性能较差,未能推广使用。


免疫组化标记的各种方法.jpg

下面是免疫组化荧光标记的步骤


1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。

 

2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。

 

3.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片上加40~50 ul 抗体,应能盖住切片)。

 

4.  用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。


5.  以PBS冼玻片3次(5 min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。

 

6.  稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每载玻片可加40~50 ul 抗体)。

 

7.  将第二抗体加于切片上,置加湿盒中室温温育1 h,以PBS洗玻片3次(5 min/次)。

 

8.  将盖玻片放于纸巾上,滴加1滴Gelvatol 于盖玻片中央。翻过载玻片放于盖玻片上(勿施压),将玻片置工作台上,用铝箔覆盖避光放置30 min,使Gelvatol 凝结。
 

9.  显微镜下观察结果,或置玻片盒中贮于4℃。


免疫荧光标记技术(immunofluorescencetechnique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,可用于(1)检查抗原抗体结合部位(2)免疫学和组织学检测。

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