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星戈瑞定制-荧光标记多肽/蛋白的不同之处,标记/使用量/纯化

时间:2023-02-27    阅读:379    点赞:0

不管是肽还是蛋白,都没有颜色的,需要提前给多肽或者蛋白标记上荧光物质。比如上期提到的Cy系列菁染料、FITC、RB等。

 

多肽荧光标记和蛋白荧光标记有什么区别呢?

1、 在精准标记上有所不同。

2、 荧光分子的使用量不同。

3、 标记后的环境纯化不同。

 

关于精准标记:

多肽荧光标记通常在多肽合成过程中标记。此时其他所有活性基团均被保护起来,所以多肽的荧光标记是非常精准的定点标记。

 

蛋白的荧光标记是非定点标记的,也称随机标记。通常一个蛋白分子中会有很多个氨基,巯基,或者其他基团。

荧光染料与蛋白分子的氨基结合,因为氨基的数量不是唯一的,所以蛋白分子和荧光基团会出现很多种组合,最终产物肯定是分子结构不单一的混合物。

 

(不过在一些实验研究中,这个因素可以忽略,只要蛋白分子被标记上荧光基团就行,而不在乎荧光基团标记在哪个位点。)

 

关于荧光分子使用量:

多肽荧光标记中,通常其荧光分子的使用量是蛋白标记使用量的数十倍,甚至百余倍,例如想拿到5mg 95%荧光标记的多肽,至少需要200mg或300mg荧光分子。

 

蛋白荧光标记可采取等摩尔量的投料比,荧光分子的用量可能只有几毫克。

所以受荧光分子原料的价格限制,多肽荧光标记的种类很少,常见的就FAM、FITC、TAMRA、Rhodamine B等。

 

标记后的环境纯化不同:

多肽荧光标记之后,通常会采用高浓度三氟乙酸处理,处于强酸环境中,然后通过HPLC纯化。

蛋白荧光标记后的处理就温和多了,可可直接通过透析、超滤、脱盐柱或HPLC纯化。

 

星戈瑞stargraydye分享科研用材料。(2023.2)

 


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