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星戈瑞-荧光素标记抗体的搭配选择与保存

时间:2022-09-28    阅读:494    点赞:0

荧光素FITC是较为常用的标记抗体的方法,并应用于流式细胞术的细胞免疫学检测及免疫分析等实验中,下面小编从荧光素的选择搭配和制备保存来介绍:

 

选择搭配:

01流式细胞仪的配置

仪器需配备可激发相应荧光素的激光管;对于多荧光素实验,仪器可同时检测多种细胞荧光。

 

02

染料的亮度与抗原表达量

低表达量的抗原,应使用高亮度荧光素;高表达量的抗原,应使用低亮度荧光素。

03荧光素之间的光谱重叠

光谱重叠严重的荧光素检测会导致荧光溢漏,干扰检测结果,应选择光谱重叠小的荧光素组合。

04

复合染料联合使用的选择

常见的复合染料有PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、APC-Cy7等,复合染料的信号衰退会降低APC或PE的灵敏度,避免复合染料联合使用带来的假阳性。

05

红色激光激发自发荧光样本

荧光通道可观察到自发荧光,对自发荧光较强的细胞,选择红光激发,发射波长长的荧光素可得到较好的S/N比值;对自发荧光比较弱的细胞,发射波长长的荧光素对S/N提高没有改善。

 

制备保存:

(1)以4℃或-20℃低温保存,防止抗体活性降低和蛋白质变性。

(2)加入硫柳汞或叠氮钠防腐。

(3)真空干燥后更易长期保存。


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